目的：探究肝功与血清学指标水平检验在脂肪肝诊断中的应用价值。方法：选取2021年至2022年期间肝胆科收治符合《肝脏疾病诊疗标准-脂肪肝篇》中脂肪肝诊断依据患者50例为探查对象，同期选取健康体检者50例为参照对象，均给予肝功与血清学指标水平检验，分析检验结果，计算单一指标检验精准性与联合检验精准性。结果：脂肪肝组谷－丙转氨酶（ALT）、白蛋白（AlB）、总蛋白（TP）水平低于健康体检者，谷－草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰转肽酶（GGT）、直接胆红素（DBIL）、总胆红素（TBIL）水平高于健康体检者，统计结果显示（P<0.05），组间差异有意义；脂肪肝组总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平高于健康体检者组，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平低于健康体检者组，统计结果显示（P<0.05），组间差异有意义；肝功检验准确率略高于血清学指标检验准确率，肝功+血清学指标联合检验准确率显著高于单一检验准确率，统计结果显示（P<0.05），组间差异有意义。结论：肝功与血清学指标水平检验在脂肪肝诊断中具有较高特异性，数值显著异于健康体检者，联合检验可获得更高准确率，具有诊断价值。